明膠空心膠囊中鉻的檢測培訓資料

——轉自陜西省食品藥品檢驗所

2012年5月

主要內(nèi)容：

一、背景資料

二、檢測方法

三、方法學驗證

四、注意事項

一、   背景資料

2012年4月15日，央視《每周質(zhì)量報告》欄目披露了國內(nèi)部分醫(yī)藥生產(chǎn)企業(yè)使用皮革明膠制造膠囊，空心膠囊鉻超標，在社會上反響巨大。

圖表 1 明膠殼分類

明膠空心膠囊（Vacant Capsules）

系由膠囊用明膠加輔料制成的空心硬膠囊。由帽、體兩節(jié)膠囊殼組成，可容納各種藥粉、液體、半固體和藥片。可掩飾藥物的異味，易于吞服，具良好的崩解能力，較長的保質(zhì)期等優(yōu)點。

規(guī)格尺寸：

從大到小依次為000#、00#、0#、1#、2#、3#、4#、5#等8種型號。

明膠藥用空心膠囊的成分

主要原材料：

由明膠、甘油、水以及其它的藥用材料（TiO₂）組成。明膠約占所有原輔料的90%以上。明膠是從動物（牛、馬、豬、魚、驢）的皮、骨、腱、鱗等含膠原蛋白的組織，經(jīng)過酸、堿或酶水解處理以后降解生產(chǎn)的非均勻多肽混合物，由多種氨基酸所組成。

明膠成分：85～90%蛋白質(zhì)，0.3%～0.2%礦物質(zhì)，9%～12%水分。

外觀近于無色或者呈淡黃色，為透明、無特殊臭味的固體，分子量為1.75-45萬。

明膠的分類和行業(yè)標準

根據(jù)用途分為三類：藥用明膠，食用明膠和工業(yè)明膠（照相明膠）。

有關標準

膠囊用明膠：《中國藥典》2010年版（二部）（Cr：2.0mg/kg）

Gelatin：

EP7.0/BP2010（Cr：10ppm）

USP34（Cr沒有規(guī)定）

JP16（Cr沒有規(guī)定）

藥用明膠：QB-2354-2005（Cr: ：2.0mg/kg）（QB:輕工行業(yè)標準）

食品添加劑明膠：GB 6783-94 （A級：1.0mg/kg，B級：2.0mg/kg）

食用明膠：QB/T 4087-2010 （Cr:2.0mg/kg）

工業(yè)明膠：QB/T 1995-2005 （Cr：沒有規(guī)定）

二、檢測方法

《中國藥典》2010年版（二部）明膠空心膠囊項下鉻檢查項（P1204）

    取本品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸5～10ml，混勻，浸泡過夜，蓋上內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內(nèi)，進行消解。消解*后，取消解內(nèi)罐置電熱板上緩緩加熱至棕紅色蒸汽揮盡并近干，用2%硝酸轉移至50ml量瓶中，并用2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；同時制備試劑空白溶液；另取鉻單元素標準溶液，用2%硝酸稀釋制成每1ml含鉻1.0µg的鉻標準貯備液，臨用時，分別精密量取鉻標準貯備液適量，用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml含鉻0-80ng的對照品溶液。

取供試品溶液與對照溶液，以石墨爐為原子化器，照原子吸收分光光度法（附錄IV D*法），在357.9nm的波長處測定，計算，即得。含鉻不得過百萬分之二（2mg/kg）。

檢測方法-試驗設備

儀器

原子吸收分光光度計（含石墨爐原子化裝置）

電子天平

微波消解儀

電熱板或其他趕酸設備，如：恒溫消解儀、趕酸器等。

試劑

硝酸（優(yōu)級純，國藥集團）

鉻單元素標準溶液（1000µg/ml，國家標準物質(zhì)）

檢測方法-試驗步驟

檢驗樣品

膠囊劑（由明膠空心膠囊殼裝載的膠囊）

檢驗項目

明膠空心膠囊中的鉻

檢驗所需檢品量的參考值

空心膠囊殼的制備

參考附錄IE 膠囊劑裝量差異項（附錄8）

具體制備方法：傾出膠囊劑的內(nèi)容物，膠囊殼用棉棒或小刷拭凈（不得損壞囊殼），放置，待用。

膠囊劑中明膠空心膠囊殼中鉻的測定方法

1.  鉻標準貯備液的制備：

取鉻單元素標準溶液（1000µg/ml），用2%硝酸稀釋制成每1ml含鉻1.0µg的鉻標準貯備液（不得超過一個月）。

2.  標準溶液的制備：

分別精密量取鉻標準貯備液適量，用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml含鉻0-80ng的對照品溶液。臨用時現(xiàn)配。

膠囊劑中明膠空心膠囊殼中鉻測定方法（過夜）

1.  供試品溶液的制備：

精密稱取本品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸5～10ml，混勻，浸泡過夜，蓋上內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解。消解*后，取消解內(nèi)罐置電熱板上緩緩加熱至紅棕色蒸汽揮盡并近干，用2%硝酸轉移至50ml量瓶中，并加2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；同法制備試劑空白溶液，作為空白校正。

2.  測定法：

取供試品溶液與對照品溶液適量，以石墨爐為原子化器，照原子吸收分光光度法（《中國藥典》2010年版（二部）附錄IV D*法），在357.9nm的波長處測定，計算，即得。

膠囊劑中明膠空心膠囊殼中鉻新測定方法（不過夜）

取樣品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸5～10ml，100℃30分鐘使溶解，補加硝酸2ml，加水1ml，待冷卻至室溫，加0.5ml氫氟酸，進行*次消解（參考程序為10min升溫至120℃，保持5min，10min升溫至140℃，保持15min）。冷卻放氣（無需*打開消解罐蓋，之需擰松即可）。隨后進行第二次消解（參考程序為10min升溫至150℃，保持5min，10min升溫至185℃，保持15min）。冷卻后，加熱趕酸至1～2ml，2%硝酸溶液至50ml，作為供試品溶液。同法制備試劑空白溶液；另取鉻單元素標準溶液，用2%硝酸稀釋制成每1ml含鉻1µg的鉻標準貯備液，臨用時，分別精密取鉻標準貯備液適量，用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml含鉻0-80ng的對照品溶液。

測定法：

取供試品溶液與對照品溶液適量，以石墨爐為原子化器，照原子吸收分光光度法（《中國藥典》2010年版（二部）附錄IV D*法），在357.9nm的波長處測定，計算，即得。

三、方法學驗證

線性：

制備含鉻的對照品溶液至少5份，濃度依次遞增，zui高濃度吸收值應在0.8以下，保證具有較好的線性范圍，相關系數(shù)（r）≥0.99.檢驗波長：357.9nm。

準確性：

應進行整個實驗過程的（包括前處理）方法學回收率驗證，暫定回收率應為80%-120%的范圍內(nèi)。每次測定需進行隨行回收試驗。

重復性：

取限度濃度的標準品溶液重復測定5次，吸收度（測定值）的變化范圍（RSD）不得過5%。

定量限（LOQ）：

本方法定量限應不低于0.5mg/kg。

四、注意事項

1.樣品前處理是試驗中的關鍵步驟，既要保證消解*，又要保證消解過程樣品中的鉻不損失，因此試驗中建議加入10ml硝酸（優(yōu)級純），并需要浸泡過夜后一步消解/或不過夜二步消解。參考消解程序為：5min由室溫升至120℃，維持3min；6min由120℃升至150℃，維持2min；6min由150℃升至180℃，維持20min。

注：國產(chǎn)微波消解的參考消解程序：120℃，維持2min；145℃，維持2min；160℃，維持2min。

2.為避免玻璃容器的干擾，試驗中宜采用塑料容量瓶（聚丙烯材質(zhì)）定容。

3.不同原子吸收儀試驗參數(shù)可能不同，可根據(jù)原子吸收儀說明書中推薦程序設    定測定參數(shù)（參考石墨爐升溫程序如下：5s升溫至100℃，保持10s；5s升溫至500℃，保持10s；0s升溫至2100℃，保持3s；0s升溫至2200℃，保持2s）

4. 含鈦白 粉的膠囊殼（不透明膠囊）建議在微波消解時，樣品中除加硝酸外可另加0.5ml氫氟酸，其他同供試品溶液制備，注意空白校正和方法學驗證。

5. 實驗用水：應采用純化水，儲藏水的容器宜用聚丙烯塑料材料制成，不宜選用玻璃容器長期儲存。

6. 試劑應采用優(yōu)級純及以上級別試劑。

7. 試驗中所用容器及器皿均需在每次使用前用鹽酸溶液（濃鹽酸：水/1:1）浸泡1h，再用硝酸溶液（濃硝酸：水/1:1）浸泡1h，再用純化水沖洗干凈后使用。微波消解容器應采用儀器清洗程序清洗，不得采用鉻酸清洗液洗滌容器。

8.可供選擇的鉻元素標準溶液（1000µg/mL）由國家有色金屬及電子材料分析測試中心提供；也可以由中國計量科學研究院提供。鉻對照貯備溶液應密封，冷暗處保存。

9.結果判斷：標準規(guī)定不得過百萬分之二（2mg/kg）。由于微量測定，結果的偏差會較大，一般兩份樣品的相對偏差≤10%，取平均值即可（低濃度尤其明顯）。

10.樣品檢測應嚴格遵守《中國藥典》2010年版（二部）“明膠空心膠囊”鉻項下方法試驗，如因試驗需要改變樣品前處理方法及檢測波長，應按照實驗室有關質(zhì)量管理程序（偏離）進行。

11.若試劑空白溶液測定值過高（宜不超過標準曲線zui低濃度點吸光度值的50%），應換用空白干擾小的溶液重新試驗。

12.注意試驗所需的所有儀器均應在計量檢定合格效期內(nèi)。

13.若供試品溶液濃度過高，可稀釋到標準曲線范圍內(nèi)進行測定。

14.由于硬、軟膠囊殼中含有不同比例的甘油（軟膠囊比例較高，甘油：明膠比例可達1:2），在進行微波消解時，甘油可與硝酸產(chǎn)生反應，容易爆罐，請注意消解時的安全監(jiān)控，盡量在前處理時預消解。